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Guangzhou lian ze chemical co., LTD .
— 新聞中心 —
 

中華人民共和國國家標準室內空氣質量標準

瀏覽次數:55 日期:2017-12-16

1、範圍 
     本標準規定了室內空氣質量參數及檢驗方法。 
    本標準適用於住宅和辦公建築物。 
2、規範性引用文件 
    下列文件中的條款通過本標準的引用而成為本標準的條款。凡是注日期的引用文件,其隨後所有的修改(不包括勘誤內容)或修訂版均不適用於本標準,然而,鼓勵根據本標準達成的各方研究是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件,其最新版本適用於本標準。
GB 6921-86
大氣飄塵濃度測定方法 重量法
GB 9801-88
空氣質量 一氧化碳的測定 非分散紅外法
GB 11737-89
居住區大氣中苯、甲苯和二甲苯衛生檢驗標準方法 氣相色譜法
GB 12372-90
居住區大氣中二氧化氮檢驗標準方法 改進的 Saltzman 法
GB/T 14679-93
空氣質量 氨的測定 次氯酸鈉 - 水楊酸分光光度法
GB/T 14669-93
空氣質量 氨的測定 離子選擇電極法
GB/T 14582-93
環境空氣中氡的標準測量方法
GB 14677-93
空氣質量 甲苯、二甲苯、苯乙烯的測定 氣相色譜法
GB/T 15262-94
環境空氣 二氧化硫的測定 甲醛吸收 - 副玫瑰苯胺分光光度法
GB/T 15435-1995
環境空氣 二氧化氮的測定 Saltzman 法
GB/T 15438-1995
環境空氣 臭氧的測定 紫外光度法
GB/T 15439-1995
環境空氣 苯並 [a] 芘測定 高效液相色譜法
GB/T 15516-1995
空氣質量 甲醛的測定 乙酰丙酮分光光度法
GB/T 16128-1995
居住區大氣中二氧化硫衛生檢驗標準方法 甲醛溶液吸收 - 鹽酸副玫瑰苯胺分光光度法
GB/T 16129-1995
居住區大氣中甲醛衛生檢驗標準方法 分光光度法
GB/T 16146-1995
住房內氡濃度控製標準
GB/T 16147-1995
空氣中氡濃度的閃爍瓶測量方法
GB/T 17095-1997
室內空氣中可吸入顆粒物衛生標準
GB/T 18204.18-2000
公共場所室內新風量測定方法—示蹤氣體法
GB/T 18204.23-2000
公共場所空氣中一氧化碳檢驗方法
GB/T 18204.24-2000
公共場所空氣中二氧化碳檢驗方法
GB/T 18204.25-2000
公共場所空氣中氨檢驗方法
GB/T 18204.26-2000
公共場所空氣中甲醛測定方法
GB/T 18204.27-2000
公共場所空氣中臭氧檢驗方法
 
5 室內空氣質量檢驗
     5.1 室內空氣中各種化學汙染物采樣和檢驗方法見附錄 A 和附錄 B 。
     5.2 室內空氣中苯濃度的測定方法見附錄 C 。
5.3 室內空氣中總揮發性有機物( TVOC )的檢驗方法見附錄 D 。
5.4 室內空氣中細菌總數檢驗方法見附錄 E 。
5.5 室內熱環境參數的檢驗方法見附錄 F 。
||
附錄 A
(規範性附錄)
室內空氣采樣技術導則
1、範圍
本導則在進行室內空氣汙染物監測時,對采樣點位,采樣高度,采樣時間和頻率,以及采樣方法和質量保證措施等項做出規定。 本導則作為《室內空氣質量標準》配套的空氣采樣技術的指導原則,適用於《室內空氣質量標準》中所規定的各種化學汙染物的采樣。
2、選點要求
2.1 采樣點的數量:采樣點的數量根據監測室內麵積大小和現場情況而確定,以期能正確反映室內空氣汙染物的水平。原則上小於 50m 2 的房間應設 1~3 個點; 50~100m 2 設     3~5 個點; 100m 2 以上至少設 5 個點。在對角線上或梅花式均勻分布。
2.2 采樣點應避開通風口,離牆壁距離應大於 0.5m 。
2.3 采樣點的高度:原則上與人的呼吸帶高度相一致。相對高度 0.5m~1.5m 之間。
3、采樣時間和頻率
采樣前至少關閉門窗 4 小時。日平均濃度至少連續采樣 18 小時, 8 小時平均濃度至少連續采樣 6 小時, 1 小時平均濃度至少連續采樣 45 分鍾。
4、采樣方法和采樣儀器
根據汙染物在室內空氣中存在狀態,選用合適的采樣方法和儀器,用於室內的采樣器的噪聲應小於 50dB 。具體采樣方法應按各個汙染物檢驗方法中規定的方法和操作步驟進行。
5、采樣的質量保證措施
5.1 氣密性檢查:有動力采樣器在采樣前應對采樣係統氣密性進行檢查,不得漏氣。
5.2 流量校準:采樣係統流量要能保持恒定,采樣前和采樣後要用一級皂膜計校準采樣係統進氣流量,誤差不超過 5% 。
采樣器流量校準:在采樣器正常使用狀態下,用一級皂膜計校準采樣器流量計的刻度,校準 5 個點,繪製流量標準曲線。記錄校準時的大氣壓力和溫度。
5.3 空白檢驗:在一批現場采樣中,應留有兩個采樣管不采樣,並按其他樣品管一樣對待,作為采樣過程中空白檢驗,若空白檢驗超過控製範圍,則這批樣品作廢。
5.4 儀器使用前,應按儀器說明書對儀器進行檢驗和標定。
5.5 在計算濃度時應用下式將采樣體積換算成標準狀態下的體積:
式中 V 0 —換算成標準狀態下的采樣體積, L ;
V —采樣體積, L ;
T 0 —標準狀態的絕對溫度, 273K ;
T —采樣時采樣點現場的溫度( t )與標準狀態的絕對溫度之和,( t+273 ) K ;
P 0 —標準狀態下的大氣壓力, 101.3kPa ;
P —采樣時采樣點的大氣壓力, kPa 。
5.6 每次平行采樣,測定之差與平均值比較的相對偏差不超過 20% 。
6、記錄和報告
采樣時要對現場情況、各種汙染源、采樣日期、時間、地點、數量、布點方式、大氣壓力、氣溫、相對濕度、風速以及采樣者簽字等做出詳細記錄,隨樣品一同報到實驗室。
附錄 B
(規範性附錄)
室內空氣中各種參數的檢驗方法 *
 
汙染物
檢驗方法
來源
(1)
二氧化硫 SO 2
甲醛溶液吸收 —— 鹽酸副玫瑰苯胺分光光度法
( 1 ) GB/T 16128-1995
( 2 ) GB/T 15262-94
(2)
二氧化氮  NO 2
改進的 Saltzaman 法
( 1 ) GB/ 12372-90
( 2 ) GB/T 15435-1995
(3)
一氧化碳  CO
( 1 )非分散紅外法
( 2 )不分光紅外線氣體分析法 、氣相色譜法 、汞置換法
( 1 ) GB 9801-88
<, SPAN style="FONT-SIZE: 9pt; COLOR: #666666; FONT-FAMILY: 宋體; mso-ascii-font-family: 'Times New Roman'; mso-hansi-font-family: 'Times New Roman'">( 2 ) GB/T 18204.23-2000
(4)
二氧化碳  CO 2
( 1 )不分光紅外線氣體分析法
( 2 )氣相色譜法
( 3 )容量滴定法
GB/T 18204.24-2000
(5)
氨  NH3
( 1 )靛酚藍分光光度法
納氏試劑分光光度法
( 2 )離子選擇電極法
( 3 )次氯酸鈉—水楊酸分光光度法
( 1 ) GB/T 18204.25-2000
( 2 ) GB/T 14669-93
( 3 ) GB/T 14679-93
(6)
臭氧  0 3
( 1 )紫外光度法
( 2 )靛藍二磺酸鈉分光光度法
( 1 ) GB/T 15438-1995
( 2 ) GB/T 18204.27-2000
(7)
甲醛  HCHO
•  AHMT 分光光度法
•  酚試劑分光光度法
氣相色譜法
( 3 )乙酰丙酮分光光度法
( 1 ) GB/T 16129-95
( 2 ) GB/T 18204.26-2000
( 3 ) GB/T 15516-95
(8)
苯  C 6 H 6
氣相色譜法
•  附錄 C
( 2 ) GB 11737-89
( 9 )
甲苯 C 7 H 8 、
二甲苯 C 8 H 10
氣相色譜法
GB 14677-93
(10)
苯並 [a] 芘
B(a)P
高壓液相色譜法
GB/T 15439-1995
(11)
可吸入顆粒
PM10
撞擊式 —— 稱重法
GB/T 17095-1997
(12)
總揮發性有機物
TVOC
氣相色譜法
附錄 D
 
(13)
細菌總數
撞擊法
附錄 E
(14)
溫度、相對濕度、空氣流速
熱環境參數的檢驗方法
附錄 F
(15)
新風量
示蹤氣體法
GB/T18204.18-2000
(16)
氡 Rn
( 1 )空氣中氡濃度的閃爍瓶測量方法
( 2 )環境空氣中氡的標準測量方法
( 1 ) GB/T 16147-1995
( 2 ) GB/T 14582-93
* 注:檢驗方法中( 1 )法為仲裁法。
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附錄 C
(規範性附錄)
空氣中苯濃度的測定
(毛細管氣相色譜法)
1、方法提要
1.1 相關標準和依據
本方法主要依據 GB 11737-89 居住區大氣中苯、甲苯和二甲苯衛生檢驗標準方法—氣相色譜法。
1.2 原理:空氣中苯用活性炭管采集,然後用二硫化碳提取出來。用氫火焰離子化檢測器的氣相色譜儀分析,以保留時間定性,峰高定量。
1.3 幹擾和排除:空氣中水蒸汽或水霧量太大,以至在碳管中凝結時,嚴重影響活性炭的穿透容量和采樣效率。空氣濕度在 90% 時,活性炭管的采樣效率仍然符合要求。空氣中的其他汙染物幹擾,由於采用了氣相色譜分離技術,選擇合適的色譜分離條件可以消除。
2、適用範圍
||
2.1 測定範圍:采樣量為 20L 時,用 1ml 二硫化碳提取,進樣 1μl ,測定範圍為 0.05~10 mg/m 3 。
2.2 適用場所:本法適用於室內空氣和居住區大氣中苯濃度的測定。
3、試劑和材料
3.1 苯:色譜純。
3.2 二硫化碳:分析純,需經純化處理,保證色譜分析無雜峰。
3.3 椰子殼活性炭: 20~40 目,用於裝活性炭采樣管。
3.4 純氮: 99.99% 。
4、儀器和設備
4.1 活性炭采樣管:用長 150mm ,內徑 3.5~4.0mm ,外徑 6mm 的玻璃管,裝入 100mg 椰子殼活性炭,兩端用少量玻璃棉固定。裝好管後再用純氮氣於 300~350 ℃溫度條件下吹 5~10min ,然後套上塑料帽封緊管的兩端。此管放於幹燥器中可保存 5 天。若將玻璃管熔封,此管可穩定三個月。
4.2 空氣采樣器:流量範圍 0.2~1L/min ,流量穩定。使用時用皂膜流量計校準采樣係統在采樣前和采樣後的流量。流量誤差應小於 5% 。
4.3 注射器: 1ml 。體積刻度誤差應校正。
4.4 微量注射器: 1μl , 10μl 。體積刻度誤差應校正。
4.5 具塞刻度試管: 2ml 。
4.6 氣相色譜儀:附氫火焰離子化檢測器。
4.7 色譜柱: 0.53mm × 30mm 寬徑非極性石英毛細管柱。
5、采樣和樣品保存
在采樣地點打開活性炭管,兩端孔徑至少 2mm ,與空氣采樣器入氣口垂直連接,以 0.5L/min 的速度,抽取 20L 空氣。采樣後,將管的兩端套上塑料帽,並記錄采樣時的溫度和大氣壓力。樣品可保存 5 天。
6、分析步驟
6.1 色譜分析條件:由於色譜分析條件常因實驗條件不同而有差異,所以應根據所用氣相色譜儀的型號和性能,製定能分析苯的最佳的色譜分析條件。
6.2 繪製標準曲線和測定計算因子:在與樣品分析的相同條件下,繪製標準曲線和測定計算因子。
6.2.1 用標準溶液繪製標準曲線:於 5.0ml 容量瓶中,先加入少量二硫化碳,用 1μL 微量注射器準確取一定量的苯( 20 ℃時, 1μl 苯重 0.8787mg )注入容量瓶中,加二硫化碳至刻度,配成一定濃度的儲備液。臨用前取一定量的儲備液用二硫化碳逐級稀釋成苯含量分別為 2.0 、 5.0 、 10.0 、 50.0μg/ml 的標準液。取 1μL 標準液進樣,測量保留時間及峰高。每個濃度重複 3 次,取峰高的平均值。分別以 1μL 苯的含量( μg/ml )為橫坐標( μg ),平均峰高為縱坐標( mm ),繪製標準曲線。並計算回歸線的斜率,以斜率的倒數 Bs[μg/mm] 作樣品測定的計算因子。
6.3 樣品分析:將采樣管中的活性炭倒入具塞刻度試管中,加 1.0ml 二硫化碳,塞緊管塞,放置 1h ,並不時振搖。取 1μl 進樣,用保留時間定性,峰高( mm )定量。每個樣品作三次分析,求峰高的平均值。同時,取一個未經采樣的活性炭管按樣品管同時操作,測量空白管的平均峰高( mm )。
7、結果計算
7.1 將采樣體積按式( 1 )換算成標準狀態下的采樣體積
式中 c —空氣中苯或甲苯、二甲苯的濃度, mg/m 3 ;
h —樣品峰高的平均值, mm ;
h ' —空白管的峰高, mm ;
B s —由 6.2.1 得到的計算因子, μg/mm ;
E s —由實驗確定的二硫化碳提取的效率;
V 0 —標準狀況下采樣體積, L 。

8、方法特性
8.1 檢測下限:采樣量為 20L 時,用 1ml 二硫化碳提取,進樣 1μl ,檢測下限為 0.05mg/m 3
8.2 線性範圍: 10 6
8.3 精密度:苯的濃度為 8.78 和 21.9μg/ml 的液體樣品,重複測定的相對標準偏差 7% 和 5% 。
8.4 準確度:對苯含量為 0.5 , 21.1 和 200μg 的回收率分別為 95% , 94% 和 91% 。
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附錄 D
(規範性附錄)
室內空氣中總揮發性有機物( TVOC )的檢驗方法
(熱解吸 / 毛細管氣相色譜法)
1、方法提要
1.1 相關標準和依據
ISO 16017-1 “Indoor , ambiant and workplace air — Sampling and analysis of volatile organic compounds by sorbent tube/thermal desorption/capillary gas chromatography — part 1 : pumped sampling”
1.2 原理
選擇合適的吸附劑( Tenax GC 或 Tenax TA ),用吸附管采集一定體積的空氣樣品,空氣流中的揮發性有機化合物保留在吸附管中。采樣後,將吸附管加熱,解吸揮發性有機化合物,待測樣品隨惰性載氣進入毛細管氣相色譜儀。用保留時間定性,峰高或峰麵積定量。
1.3 幹擾和排除
采樣前處理和活化采樣管和吸附劑,使幹擾減到最小;選擇合適的色譜柱和分析條件,本法能將多種揮發性有機物分離,使共存物幹擾問題得以解決。
2、適用範圍
2.1 測定範圍:本法適用於濃度範圍為 0.5 m g/m 3 ~100mg/m 3 之間的空氣中 VOC S 的測定。
2.2 適用場所:本法適用於室內、環境和工作場所空氣,也適用於評價小型或大型測試艙室內材料的釋放。
3、試劑和材料
分析過程中使用的試劑應為色譜純;如果為分析純,需經純化處理,保證色譜分析無雜峰。
3.1 VOC S :為了校正濃度,需用 VOC S 作為基準試劑,配成所需濃度的標準溶液或標準氣體,然後采用液體外標法或氣體外標法將其定量注入吸附管。
3.2 稀釋溶劑:液體外標法所用的稀釋溶劑應為色譜純,在色譜流出曲線中應與待測化合物分離。
3.3 吸附劑:使用的吸附劑粒徑為 0.18~0.25mm ( 60~80 目),吸附劑在裝管前都應在其最高使用溫度下,用惰性氣流加熱活化處理過夜。為了防止二次汙染,吸附劑應在清潔空氣中冷卻至室溫,儲存和裝管。解吸溫度應低於活化溫度。由製造商裝好的吸附管使用前也需活化處理。
3.4 純氮: 99.99% 。
4、儀器和設備
4.1 吸附管:是外徑 6.3mm 內徑 5mm 長 90mm 內壁拋光的不鏽鋼管,吸附管的采樣入口一端有標記。吸附管可以裝填一種或多種吸附劑,應使吸附層處於解吸儀的加熱區。根據吸附劑的密度,吸附管中可裝填 200~1000mg 的吸附劑,管的兩端用不鏽鋼網或玻璃纖維毛堵住。如果在一支吸附管中使用多種吸附劑,吸附劑應按吸附能力增加的順序排列,並用玻璃纖維毛隔開,吸附能力最弱的裝填在吸附管的采樣人口端。
4.2 注射器:可精確讀出 0.1 m L 的 10 m L 液體注射器;可精確讀出 0.1 m L 的 10 m L 氣體注射器;可精確讀出 0.01mL 的 1mL 氣體注射器。
4.3 采樣泵:恒流空氣個體采樣泵,流量範圍 0.02~0.5L/min ,流量穩定。使用時用皂膜流量計校準采樣係統在采樣前和采樣後的流量。流量誤差應小於 5% 。
4.4 氣相色譜儀:配備氫火焰離子化檢測器、質譜檢測器或其他合適的檢測器。
色譜柱:非極性(極性指數小於 10 )石英毛細管柱。
4.5 熱解吸儀:能對吸附管進行二次熱解吸,並將解吸氣用惰性氣體載帶進入氣相色譜儀。解吸溫度、時間和載氣流速是可調的。冷阱可將解吸樣品進行濃縮。
4.6 液體外標法製備標準係列的注射裝置:常規氣相色譜進樣口,可以在線使用也可以獨立裝配,保留進樣口載氣連線,進樣口下端可與吸附管相連。
5、采樣和樣品保存
將吸附管與采樣泵用塑料或矽橡膠管連接。個體采樣時,采樣管垂直安裝在呼吸帶;固定位置采樣時,選擇合適的采樣位置。打開采樣泵,調節流量,以保證在適當的時間內獲得所需的采樣體積( 1~10L )。如果總樣品量超過 1mg ,采樣體積應相應減少。記錄采樣開始和結束時的時間、采樣流量、溫度和大氣壓力。
采樣後將管取下,密封管的兩端或將其放入可密封的金屬或玻璃管中。樣品可保存 5 天。
 6、分析步驟
6.1 樣品的解吸和濃縮
將吸附管安裝在熱解吸儀上,加熱,使有機蒸氣從吸附劑上解吸下來,並被載氣流帶入冷阱,進行預濃縮,載氣流的方向與采樣時的方向相反。然後再以低流速快速解吸,經傳輸線進入毛細管氣相色譜儀。傳輸線的溫度應足夠高,以防止待測成分凝結。解吸條件 ( 見表 1) 。
表 1 解吸條件
解吸溫度
250 ℃ ~325 ℃
解吸時間
5~15min
解吸氣流量
30~50ml/min
冷阱的製冷溫度
+20 ℃ ~-180 ℃
冷阱的加熱溫度
250 ℃ ~350 ℃
冷阱中的吸附劑
如果使用,一般與吸附管相同, 40~100mg
載氣
氦氣或高純氮氣
分流比
樣品管和二級冷阱之間以及二級冷阱和分析柱之間的分流比應根據空氣中的濃度來選擇
6.2 色譜分析條件
可選擇膜厚度為 1 ~ 5 m m 50m × 0.22mm 的石英柱,固定相可以是二甲基矽氧烷或 7% 的氰基丙烷、 7% 的苯基、 86% 的甲基矽氧烷。柱操作條件為程序升溫,初始溫度 50 ℃保持 10min ,以 5 ℃ /min 的速率升溫至 250 ℃。
6.3 標準曲線的繪製
氣體外標法:用泵準確抽取 100 m g/m 3 的標準氣體 100ml 、 200ml 、 400ml 、 1L 、 2L 、 4L 、 10L 通過吸附管,製備標準係列。
液體外標法:利用 4.6 的進樣裝置取 1~5 m l 含液體組分 100 m g/ml 和 10 m g/ml 的標準溶液注入吸附管,同時用 100ml/min 的惰性氣體通過吸附管, 5min 後取下吸附管密封,製備標準係列。
用熱解吸氣相色譜法分析吸附管標準係列,以扣除空白後峰麵積的對數為縱坐標,以待測物質量的對數為橫坐標,繪製標準曲線。
6.4 樣品分析
每支樣品吸附管按繪製標準曲線的操作步驟(即相同的解吸和濃縮條件及色譜分析條件)進行分析,用保留時間定性,峰麵積定量。
7、結果計算
7.1  將采樣體積按式( 1 )換算成標準狀態下的采樣體積
式中 V 0 —換算成標準狀態下的采樣體積, L ;
V —采樣體積, L ;
T 0 —標準狀態的絕對溫度, 273K ;
T —采樣時采樣點現場的溫度( t )與標準狀態的絕對溫度之和,( t+273 ) K ;
P 0 —標準狀態下的大氣壓力, 101.3kPa ;
P —采樣時采樣點的大氣壓力, kPa 。
7.2  TVOC 的計算
( 1 )應對保留時間在正己烷和正十六烷之間所有化合物進行分析。
( 2 )計算 TVOC ,包括色譜圖中從正己烷到正十六烷之間的所有化合物。
( 3 )根據單一的校正曲線,對盡可能多的 VOC S 定量,至少應對十個最高峰進行定量,最後與 TVOC 一起列出這些化合物的名稱和濃度。
( 4 )計算已鑒定和定量的揮發性有機化合物的濃度 S id 。
( 5 )用甲苯的響應係數計算未鑒定的揮發性有機化合物的濃度 S un 。
( 6 ) S id 與 S un 之和為 TVOC 的濃度或 TVOC 的值。
( 7 )如果檢測到的化合物超出了( 2 )中 VOC 定義的範圍,那麽這些信息應該添加到 TVOC 值中。
7.3 空氣樣品中待測組分的濃度按( 2 )式計算
式中 : c —空氣樣品中待測組分的濃度 , mg /m 3 ;
F —樣品管中組分的質量 , mg ;
B —空白管中組分的質量 , mg;
V 0 —標準狀態下的采樣體積, L 。
 
8、方法特性
8.1 檢測下限:采樣量為 10L 時,檢測下限為 0.5 m g/m 3
8.2 線性範圍: 10 6
8.3 精密度:在吸附管上加入 10μg 的混合標準溶液, Tenax TA 的相對標準差範圍為 0.4% 至 2.8% 。
8.4 準確度: 20 ℃、相對濕度為 50% 的條件下,在吸附管上加入 10mg/ml 的正己烷, Tenax TA 、 Tenax GR ( 5 次測定的平均值)的總不確定度為 8.9% 。
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附錄 E
(規範性附錄)
室內空氣中細菌總數檢驗方法
1、適用範圍
本方法適用於室內空氣細菌總數測定。
2、定義
撞擊法 (impacting method) 是采用撞擊式空氣微生物采樣器采樣,通過抽氣動力作用,使空氣通過狹縫或小孔而產生高速氣流 , 使懸浮在空氣中的帶菌粒子撞擊到營養瓊脂平板上 , 經 37 ℃、 48h 培養後 , 計算出每立方米空氣中所含的細菌菌落數的采樣測定方法。
3、儀器和設備
3.1 高壓蒸汽滅菌器。
3.2 幹熱滅菌器。
3.3 恒溫培養箱。
3.4 冰箱。
3.5 平皿 ( 直徑 9cm) 。
3.6 製備培養基用一般設備:量筒,三角燒瓶, pH 計或精密 pH 試紙等。
3.7 撞擊式空氣微生物采樣器。
采樣器的基本要求 :
(1) 對空氣中細菌捕獲率達 95 %。
(2) 操作簡單 , 攜帶方便 , 性能穩定 , 便於消毒。
4 營養瓊脂培養基
4.1. 成分 :
蛋白腖 20g
牛肉浸膏 3g
氯化鈉 5g
瓊脂 15~20g
蒸餾水 1000ml
4.2 製法 將上述各成分混合 , 加熱溶解 , 校正 pH 至 7.4 ,過濾分裝, 121 ℃, 20min 高壓滅菌。撞擊法參照采樣器使用說明製備營養瓊脂平板。
5 操作步驟
5.1 選擇有代表性的房間和位置設置采樣點。將采樣器消毒 , 按儀器使用說明進行采樣。
5.2 樣品采完後,將帶菌營養瓊脂平板置 36 ± 1 ℃恒溫箱中 , 培養 48h ,計數菌落數 , 並根據采樣器的流量和采樣時間 , 換算成每 m 3 空氣中的菌落數。以 cfu/m 3 報告結果。
附錄 E
(規範性附錄)
熱環境參數的檢驗方法
熱環境參數測試的要求、方法和儀器 *
測試項目
測試範圍
準確度
測試方法和儀器
溫度
-10~50 ℃
± 0.3 ℃
玻璃溫度計(包括幹濕球溫度計)
數字式溫度計(熱電偶、熱電阻、半導體式包括數字式濕度計或風速計所附的溫度計)
相對濕度
12%~99%
± 3%
幹濕球溫度計
氯化鋰露點式濕度計
電容式數字濕度計
空氣流速
0.01~20m/s
± 5%
熱球式電風速計
熱線式電風速計
 
* 各種測試儀器的使用方法見儀器的使用說明書。
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HPLC法測定布洛芬糖漿劑的含量
 布洛芬糖漿劑除具有布洛芬片劑的藥效外,還具有吸收快、利於兒童服用等特點[1]。但由於布洛芬不溶於水,其糖漿劑中均含有堿性物質以增加其溶解度[2,3],所以不能再用藥典規定的中和法測定布洛芬含量。本文采用HPLC法測定了布洛芬糖漿劑的含量,獲得了較滿意的結果。
            1 儀器與試藥
            日本島津LC-6A高效液相色譜儀、SPD-6AV紫外檢測器、SCL-6B係統控製器、C-R4A數據處理機、LC-6A輸液泵。
            布洛芬對照品:山東新華製藥廠生產,采用本文色譜條件檢查為單一色譜峰,含量為99.80%;布洛芬糖漿劑[3]:自製,標示量為2 %(g.mL-1);二苯胺(內標)及無水甲醇均為分析純。
            2 色譜條件
            色譜柱:YWG?C18 4.6 mm×250 mm;流動相:取磷酸二氫鈉380 mg與磷酸氫二鈉50 mg,加水溶解至1000  mL,用磷酸調pH至3.0,取出250 mL加甲醇750 mL,混勻。流速:1 mL.min-1;檢測波長220 nm;進樣量20 μL;檢測靈敏度:0.01 AUFS。
            3 標準曲線製備
            精密稱取二苯胺適量,加無水甲醇配製成0.7 mg.mL-1的溶液,作為內標溶液。另取布洛芬對照品適量,精密稱定,加無水甲醇配製成0.27 mg.mL-1的溶液,作為對照品溶液。精密量取對照品溶液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、5.0mL,分別置於50  mL量瓶中,加入內標溶液1.0 mL,用無水甲醇稀釋至刻度,搖勻,進樣20 μL。以對照品與內標的峰麵積之比為縱坐標,相應對照品濃度(mg.mL-1)為橫坐標,得回歸方程: Y=75.5X+0.0136 r=0.9997結果表明,布洛芬溶液濃度在3~30 μg.mL-1範圍內與峰麵積呈良好的線性關係。二苯胺及布洛芬的色譜圖圖1 二苯胺及布洛芬的色譜圖
            1.二苯胺 2.布洛芬
            4 回收實驗
            取布洛芬對照品約100 mg,精密稱定,定量轉移至100 mL量瓶中,按處方加入單糖漿、L-精氨酸、苯甲酸鈉、香精,用無水甲醇稀釋至刻度,搖勻。精密取上述溶液及內標溶液各1  mL,按“樣品測定”項下操作。測得平均回收率為99.89 %,RSD為0.93%,n=6。
            5 樣品測定
            取布洛芬糖漿劑約2.5 mL,精密稱定,定量轉移至50 mL量瓶中,用無水甲醇稀釋至刻度,搖勻。精密吸取上述溶液及內標溶液各1 mL置於50 mL量瓶中,用無水甲醇稀釋至刻度,搖勻,進樣20 μL。測得樣品的含量為標示量的97.23 %,n=5,RSD為0.89  %。
            6 討論
            經穩定性試驗觀察,樣品溶液在室溫下(約18 ℃)放置,每隔2 h測定1次,測至6 h,樣品標示百分含量結果的RSD為0.99%,n=3。說明樣品溶液較穩定。
            以安定為內標物,效果也較好。但由於筆者想將該法用於布洛芬糖漿劑生物利用度測定,為防止人體內安定類藥物的幹擾,所以選擇二苯胺為內標。
雙甘瞵的HPLC分析條件
摘要:
     試劑和溶液:
           四丁基硫氫酸胺,
           色譜純甲醇
           色譜純磷酸
           AR磷酸二氫鉀
           AR水:二次蒸餾水
           雙甘瞵標樣
     流動相:
   0.05moLKH2PO4,200mL+50mL甲醇+0.5
     色譜柱:Sinochrom ODS-BP  150mmX4.6mm  5um
     流量:1mL/min
     波長:195nm
     柱溫:35度。
HPLC同時測定大黃素和大黃酚的含量
大黃的有效成分為大黃素、大黃酚、大黃酸、蘆薈大黃素、大黃素甲醚及其甙類等蒽醌類成分。有關大黃及其製劑有效成分含量測定方法報道很多,如比色法、薄層-紫外分光光度法、HPLC法等。這裏簡單介紹一下HPLC法同時測定大黃素和大黃酚含量時的色譜條件、樣品處理方法等。

⑴《中國藥典》2005版大黃含量測定項:以十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑;甲醇-0.1%磷酸溶液(85:15)為流動相。檢測波長為254nm。對照品為蘆薈大黃素、大黃酸、大黃素、大黃酚、大黃素甲醚。大黃樣品前處理:甲醇回流提取—8%鹽酸超聲—三氯甲烷回流萃取。
⑵趙莉,晁若冰測定了大黃通便膠囊中大黃素和大黃酚的含量。色譜條件同⑴。儀器:LC-IOAT vp高效液相色譜儀,SPD-M10A vp光二極管陣列檢測器,Class-vp色譜工作站(日本島津)。用Luna 5 u Cl8(2)柱(150 mm×4.6 mm,ID),ODS預柱Phenomenex ODS guard cartridge system,4.0mm×3.0mm,ID)。樣品先用甲醇回流提取,提取物在2.5 mol/L硫酸溶液中加熱水解,再用氯仿提取後進行測定。
⑶張華,雪秦嵐,趙宏科,趙海雲采用HPLC測定血脂靈片中大黃素、大黃酚的含量。色譜條件同⑴,檢測波長428nm。儀器:高效液相色譜儀(包括P200Ⅱ型高壓恒流泵,UV-200Ⅱ型紫外檢測器,Echrom98色譜數據處理工作站),Shim-Pack型C18分析柱(200mm×4.6mm,5μm) 
⑷常軍民,高宏,張煊,趙軍,堵年生采用HPLC測定枝穗大黃中大黃素和大黃酚的含量。色譜條件同⑴。儀器:美國Waters 2690高效液相色譜儀,Waters 2487雙波長檢測器,Waters millennium s 色譜工作站(Waters corporation)。
⑸魏有良,楊誌一,霍彬科采用HPLC法測定化症回生片中大黃素和大黃酚的含量。色譜條件同⑴。樣品處理:甲醇回流,再上中性氧化鋁柱(100-200目,直徑1.5cm,3.5g),先用甲醇洗脫,5%氫氧化鈉洗脫,收集鹽酸調Ph1-2,乙醚萃取。
⑹王勁,李潔,馬彥,田佩瑤,彭國克采用HPLC法測定中藥消毒產品中大黃酚和大黃素的含量。色譜條件:天津特納Kromasil C18(200mm×4.6mm i.d.,7μ)色譜柱,流動相:φ=0.02mol/L KH2PO4水溶液(H3PO4調pH=3.5)/甲醇=15/85,柱溫:室溫,流速:1.0mL/min,紫外檢測波長:260nm。儀器:美國Waters公司2695高效液相色譜儀(996二極管陣列檢測器,MiUennium32色譜管理係統)。
    HPLC法同時測定大黃素和大黃酚的含量時,文獻報道所采用的色譜條件多為藥典所載的條件。流動相為甲醇-磷酸係統,另外還有乙腈-磷酸係統、甲醇-水係統、甲醇-高氯酸係統、甲醇-冰醋酸係統等;檢測波長多為254nm,也有采用430、440、438、287nm。也有以甲醇-水-異丙醇(80:10:10)磷酸調pH值為3.0,檢測波長:439nm。樣品處理方麵一般用適當溶劑回流提取,除去溶劑後氧化水解,再以有機溶劑萃取。酸溶液多為鹽酸和硫酸。
HPLC法在生物堿分析中的應用
生物堿是植物中一類重要化學成分,許多生物堿或含生物堿的提取物已廣泛用於醫藥領域,因此對不同來源的、存在於較複雜體係或基質中的生物堿進行快速、靈敏、可靠的定性和定量分析一直是受人矚目的研究課題。 
1、生物堿HPLC的分析模式 
    根據HPLC分析生物堿時所使用固定相性質、流動相組成及極性不同,其分析模式大致可分為:正相吸附色譜法、正相矽膠反相洗脫係統色譜法、反相色譜法及離子交換色譜法。 
    正相吸附色譜法:通常以矽膠基質為吸附固定相,流動相為不同極性的有機溶劑或不同比例混合溶劑,分離過程主要依靠生物堿與吸附劑吸附作用的差異實現,為了改善分離,提高溶洗脫能力,常於流動相中加濃氨液、二乙胺、三乙胺等。該法應用於生物堿分析的文獻較少。 
    正相矽膠一反相洗脫係統色譜法(NS-RE):通常采用未經化學改性的普通矽膠為固定相,以極性有機溶劑(甲醇、乙腈)和高pH緩衝溶液為流動相,分析包括生物堿在內的堿性藥物。該法柱效高,峰形對稱,是簡便有效的方法。在實際應用中,流動相的組成是主要的影響因素,流動相中除含有調節pH 的緩衝鹽外,有時還要三乙胺、溴化四丁基銨等競爭離子或烷基磺酸鈉等對離子。因此,影響保留與分離的主要因素是流動相pH、競爭離子種類及濃度 。 
    反相高效液相色譜法(RP-HPLC):近年來RP-HPLC應用於生物堿分析方麵的文獻很多,已成為常規的方法。但普通存在色譜峰的展寬拖尾,導致分離效能低,這主要緣於生物堿結構中堿性氮原子與固定相未鍵台酸性矽醇基的相互作用。即使是所測生物堿在較低濃度下,仍常產生峰漂移及峰對稱性差等現象。針對此缺陷,研究工作者從適用於堿性物質分析的反相填料的設計選擇,流動相中緩衝鹽的使用,流動相添加劑(離子對試劑、有機胺改性劑)等幾方麵進行了較為廣泛細致的研究,並取得了一定的進展。 
    離子交換色譜法:該法以陽離子交換樹脂為固定相,利用質子化的生物堿陽離子與離子交換劑交換能力的差異而達到分離生物堿的目的,有關生物堿高效液相離子交換色譜法的應用報道較少。 
2、生物堿HPLC分析檢測方法 
    目前,生物堿HPLC分析檢測方式多以紫外法為主,在定性分析方麵,紫外法檢測選擇性低,定性專屬性差。隨著二極管陣列檢測器使用的普及,顯著提高了液相分析檢測的選擇性。此外,根據生物堿的理化性質,其它檢測方式如熒光法、電化學法、蒸發光散射法亦得到了應用。近年來,液相色譜-質譜聯用技術已應用於生物堿分析,增強了對生物堿的定性檢測能力,提高了檢測靈敏度。新的接口技術及離子化方法的發展.使得HPLC-MS在生物堿的分析中得到較廣泛的應用,近年的文獻報道日漸增多。 
3、生物堿HPLC分析的樣品處理方法 
    因生物堿常具有一定的堿性,一般常用堿化液液萃取或酸水提取等方法從中草藥、中成藥及生物樣品等較複雜體係中提取純化,以達到富集和去除雜質的目的。近年來,固相萃取(SPE)技術及超臨界流體萃取等現代提取純化技術亦應用於樣品的提取純化。
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HPLC法快速測定食品中糖精鈉、苯甲酸、山梨酸和咖啡因
苯甲酸、咖啡因等食品添加劑食用過量會對人體造成傷害,國家衛生標準對這幾項指標有明確的限量,因此開展了此項調查。試驗表明,液相色譜測定各類食品中糖精鈉、苯甲酸、山梨酸和咖啡因時,即使是可樂等清涼飲料,樣品經過脫氣、稀釋、過濾的簡單處理即上機分析,也極易堵塞色譜柱,造成柱壓升高、柱效下降,對色譜柱造成難以修複的損壞;而樣品經透析處理耗時太長。本文論述了在常溫下用氫氧化鈉-硫酸鋅作為蛋白質沉澱劑,沉澱處理包括清涼飲料、酸奶、花生乳等比較粘稠的飲料以及固體食品等各類樣品中的蛋白質、澱粉等雜質,可以大大降低對色譜柱的損害,在一定的色譜條件下,在常溫下即可快速、同時分離四種被測組分,操作極為簡單、快速。 
    1 試驗部分 
    1.1 原理 
    糖精鈉、咖啡因是易溶於水的鹽類,樣品中的苯甲酸、山梨酸經氫氧化鈉溶液(O.50mol/L)浸泡後,轉化為易溶於水的苯甲酸鈉、山梨酸鈉,經沉澱蛋白質、過濾等處理後,四種被測組分滯留於水相中與雜質分離。 
    1.2 儀器與試劑 
    島津LC-10AT高效液相色譜儀 
    色譜柱:Hypersil-ODS2-C18,4.6 mm X 1 50 mm柱 
    檢測波長215nm,進樣量2OμL,流動相為甲醇+O.02mol/L 乙酸銨(35+65),流量0.50mL/min。 
    苯甲酸標準溶液:1.000g/L,稱取苯甲酸0.1000g,加20g/L碳酸氫鈉溶液5mL,加熱溶解,定容至100mL。 
    山梨酸標準溶液:1.000g/L,同苯甲酸配製。糖精鈉標準溶液:1.000g/L,稱取糖精鈉0.1702g,加水溶解,定容至200mL。 
    咖啡因標準溶液:1.000g/L一,稱取咖啡因0.1000g,加水定容至100mL。 
    混合標準液:糖精鈉、苯甲酸、山梨酸、咖啡因濃度依次為4.5,5.0,5.0,5.0 mg/L。 
    氫氧化鈉溶液:0.50mo1/L 
    硫酸鋅溶液:0.42 mol/L_ 
    乙酸銨溶液:0.02 mol/L,稱取乙酸銨1.54g用水定容至1L。 
    甲醇(色譜純) 
    1.3 試驗方法 
    1.3.1 液體樣品 
    稱取樣品0.100~5.00g於50mL比色管中(汽水振搖或微溫除去二氧化碳,配製酒類水浴加熱,除去乙醇),加入純水約5mL,加入0.50mol/L氫氧化鈉溶液1.00mL,攪勻,放置15min,混勻,加人純水約30 L,加人0.42mol/L 硫酸鋅溶液1.50 mL,混勻,加人0.50mol/L氫氧化鈉溶液1.50mL,搖勻,純水定容至50.0 mL,混勻,靜置幾分鍾,上清液過濾(雙層濾紙),棄去初濾液5 mL,濾液經0.45μm濾膜過濾,進樣量2Oμl,進行色譜分析,以保留時間定性,以峰高定量。 
    1.3.2 固體樣品 
    稱取研碎的樣品0.100~2.00g於5OmL比色管中,加人純水約30mL,加人0.50mol/L氫氧化鈉溶液1.00 mL,攪勻,放置15min以上(直到被測組分完全溶出為止),加人0.42mol/L硫酸鋅溶液1.50mL,混勻,其它操作同上。 
    2 結果與討論 
    2.1 蛋白質沉澱劑種類的選擇 
    2.1.1 亞鐵氰化鉀與乙酸鋅的沉澱分離效果分別稱取苯甲酸、山梨酸0.100Og用10mL甲醇溶解純水定容至100 mL,配製成標準溶液,純水稀釋至所需濃度,選取飲料杏仁乳一份,做苯甲酸、山梨酸的加標回收試驗。稱取飲料樣品2.00g於50mL比色管中,加人苯甲酸、山梨酸各250μg,加入純水約25mL,混勻,加人106g/L亞鐵氰化鉀溶液2.5 mL,混勻,加入220g/L乙酸鋅溶液2.5mL,混勻,純水定容至50mL,靜置幾分鍾,上清液過濾,棄去初濾液5mL,濾液經0.45μm濾膜過濾,進人色譜儀進行分析,進樣量2OμL,以保留時間定性,以峰高定量。 
    試樣經亞鐵氰化鉀與乙酸鋅沉澱後,溶液的pH在5~6範圍內,對樣品中的糖精鈉、苯甲酸鈉、山梨酸鉀(鈉)、咖啡因的測定無影響,但對樣品中的苯甲酸、山梨酸的測定有影響,加標回收率較低(在78.2~87.8之間)。因苯甲酸、山梨酸在水中的溶解度較低,加人蛋白質沉澱劑以後,與雜質一起被沉澱,影響測定的準確性。由於難以確定飲料中的苯甲酸、山梨酸是否為鉀鹽、鈉鹽,建議不采用該蛋白質沉澱劑。 
    2.1.2 氫氧化鈉與硫酸鋅的沉澱分離效果 
    試樣經該蛋白質沉澱劑沉澱後,對樣品中的糖精鈉、苯甲酸(鈉)、山梨酸(鉀)、咖啡因的測定(加標回收)均無影響,建議采用該蛋白質沉澱劑。 
    按試驗方法進行氫氧化鈉與硫酸鋅不同比例的試驗。 
    當0.50mol/L氫氧化鈉溶液與0.42mol/L硫酸鋅溶液用量為5:4時,沉澱效果最好,但保留時間發生滯後現象,不宜采用;兩者用量為5:3時,定量與定性均準確,且濾液澄清,過濾速度也較快,這恰好與理論上氫氧化鈉與硫酸鋅形成完全沉澱時所需的比例(nOH:nZn2+=2:1)相吻和,但兩者用量太少時,沉澱不完全;為使雜質完全沉澱,選擇氫氧化鈉用量為2.50mL、硫酸鋅1.50mL為處理0.100~5.0 g飲料、0.100~2.O0g固體樣品的最佳用量。 
    2.2 標準曲線及回歸方程 
    按試驗方法進行測定,4種添加劑的線性範圍、檢出限(按3倍信噪比計算)的測定。 
    2.3 樣品測定結果 
    選擇含不同被測組分的飲料樣品,分別平行測定7次。 
    選擇可樂飲料l份,分別做高、中、低濃度的加標回收試驗。 
    2.4 食品中糖精鈉、苯甲酸、山梨酸和咖啡因含量的調查 
    調查了市售飲料其中包括可樂、汽水、果汁、酸奶、牛奶、活性乳、花生乳、果凍、冰棍等共57份,其中5份含咖啡因0.002 3~O.270g/kg,17份含糖精鈉0.053~0.966g/kg,7份含苯甲酸0.0038~O.230 g/kg,16份含山梨酸0.090~0.770g/kg;醬菜、熟肉製品、熟麵製品40份,4份含糖精鈉0.916~1.04g/kg,8份含苯甲酸0.005O~5.68g/kg,3份含山梨酸0.10~0.680g/kg;醬、醬油、醋、料酒共24份,其中15份含苯甲酸0.030~1.73 g/kg,1份含山梨酸0.220g/kg。
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HPLC法鑒別五味子與南五味子
五味子為木蘭科植物五味子Schisandra Chinensis(Turcz)Bail1.的幹燥成熟果實,習稱“北五味子”,具有收斂固澀、益氣生津、補腎寧心的功效⋯ 。南五味子為木蘭科植物華東五味子
Schisandra sphenanthe Rehd.et Wills.的幹燥成熟果實,功效與五味子相似。中藥成方製劑中都明確指定用何種五味子,且《中國藥典)2000年版分別單獨製定了質量標準。市場上這兩種五味子價格相差較大,因此鑒別很重要。《中國藥典)2000年版收載的標準中有薄層色譜鑒別,都采用了五味子甲素作為對照品,再分別用各自的對照藥材作對照。作者多次實驗結果表明薄層色譜鑒別對兩種五味子鑒別專屬性不強。本文則采用HPLC法進行鑒別,重複性好、靈敏度高且直接分析的是其特征峰,鑒別結果不受環境等因素幹擾,為五味子的鑒別提供了可靠的手段。
1 儀器和試藥
1.1 儀器:高效液相色譜儀(泵:SP1000,檢測器UV2000,N2000工作站,美國光譜物理公司)。
1.2 試藥:五味子對照藥材(批號:0922—9803中國藥品生物製品檢定所);五味子(毫州恒豐藥材公司);南五味子(毫州恒豐藥材公司)。色譜純甲醇;超純水。
2 方法與結果
2.1 對照藥材溶液的製備:取五味子對照藥材粉末約0.25 g,置25 mL量瓶中,加甲醇約18 mL,超聲處理(功率250 W ,頻率20 kHz)30分鍾,取出,放冷至室溫,加甲醇至刻度,搖勻,濾過,即得。
2.2 色譜條件:色譜柱:AllitimaC18(4.6 mm×250 mm)。流動相:甲醇.水(13:7)。檢測波長:250 nm。流速:0.8mL/min。柱溫:25℃ 。
2.3 供試品溶液的製備
2.3.1 五味子藥材提取液的製備:取五味子藥材粉末(過3號篩)約0.25 g,置25 mL量瓶中,加甲醇約18 mL,超聲處理30分鍾,放冷至室溫,加甲醇至刻度,搖勻,濾過,即得。
2.3.2 南五味子藥材提取液的製備:取南五味子藥材粉末(過3號篩)約0.25 g,置25 mL量瓶中,加甲醇約18 mL,超聲處理30分鍾,放冷至室溫,加甲醇至刻度,搖勻,濾過,即得。
2.4 圖譜的繪製:分別精密吸取對照藥材溶液與供試品溶液各20 L,注入液相色譜儀,測定,見表1。
從表1中可以看出,五味子對照藥材共9個峰,樣品五味子共8個峰,南五味子共6個峰,樣品五味子與對照藥材相比少1個峰,其它峰保留時間都一致,南五味子少了3個峰,且隻有1個峰相一致,由此,可以鑒定出五味子。經過多次實驗結果,對照藥材1、2、6、7、8號峰是五味子的主要特征峰,且峰麵積較大。
3 小結與討論
    高效液相色譜法以保留時間為主要鑒別參數,若因儀器廠家、色譜柱等條件不同,則保留時間可能產生較大差異,導致圖譜鑒定操作性不強,而采用對照藥材作為對照。排除了上述因素的影響。峰號具體成分因無法買到對照品而不能確定。藥廠采購五味子時,摻雜南五味子時有發生,應仔細對照藥典標準進行鑒別,當初步鑒定為五味子,或者若懷疑有部分為南五味子時,則可以挑選出這兩種五味子。再與對照藥材分別進行HPLC圖譜鑒別,方法簡便可行。
HPLC法檢查甲硝唑葡萄糖注射液中5-HMF
摘要 采用高效液相色譜法測定甲硝唑葡萄糖注射液中5-羥甲基糠醛,以C18為固定相,以甲醇-0.2%磷酸溶液(25∶75)為流動相,檢測波長為284 nm,平均回收率為99.2%(RSD=0.61%)。
《中國醫院製劑規範》〔1〕收載的甲硝唑葡萄糖注射液項下5-羥甲基糠醛(5-HMF)檢查要求該品1∶25稀釋後在284 nm波長處吸收度不得大於0.25。但實驗證明,按上法進行甲硝唑葡萄糖注射液中5-HMF檢查,其吸收度遠大於0.25(1.50以上)。因為甲硝唑在284 nm處有吸收。中國藥典1995年版〔2〕對甲硝唑葡萄糖注射液尚未規定5-HMP的限量檢查〔2〕。為保證用藥安全,本文建立了高效液相色譜法測定甲硝唑葡萄糖注射液中5-HMF的含量,可消除甲硝唑的幹擾。現報道如下。

1 儀器與試藥
1.1 儀器 Waters 501泵,484檢測器,7725進樣器(美國)。
1.2 試藥 甲硝唑(浙江可立思安製藥公司);5-羥甲基糠醛(美國Sigma公司,H9877);甲硝唑葡萄糖注射液(浙江省新昌製藥廠,971105,971213,980124,980213,980321);甲醇(色譜純)。
2 方法與結果
2.1 色譜條件 色譜柱:Nova-pack C18(200 mm×4.6 mm, 4 μm);流動相:甲醇-0.2%磷酸溶液(25∶75);檢測波長:284 nm;流速:1.0 ml/min。
2.2 試液的配製 精密稱取5-HMF適量,加水溶解成0.5 mg/ml的溶液為5-HMF標準儲備液。
2.3 標準曲線製備 精密量取5-HMF標準儲備液適量,用水分別稀釋成5,10,15,20,25 μg/ml的溶液;取10 μl注入色譜儀中,在上述色譜條件下測得峰麵積(見圖1);以峰麵積Y對濃度X繪製標準曲線,得回歸方程y=1254x+47,r=0.9986,表明在濃度5~25 μg/ml範圍內線性良好。另取10 μl試樣重複進行,峰麵積RSD=0.48%(n=6)。
2.4 回收率測定 精密量取已測得5-HMF含量的甲硝唑葡萄糖注射液50 ml,置100 ml量瓶中,精密加入5-HMF標準儲備液1 ml,加水至刻度;按樣品測定項下方法,計算平均回收率為99.2%,RSD=0.61%(n=5)。
2.5 樣品5-HMF含量檢測 精密量取甲硝唑葡萄糖注射液10 μl注入色譜儀,按上述色譜條件,測得5-HMF的色譜峰麵積;另精密量取5-HMF標準溶液10 μl注入色譜儀中,同法測得峰麵積,按峰麵積外標法計算,結果5批樣品中5-HMF含量分別為6.1,8.3,8.6,10.9,14.7 μg/ml。
3 討論
  實踐證明,若生產過程不規範(如滅菌溫度過高,時間過長)很容易導致5-HMF含量偏高。因此,控製甲硝唑葡萄糖注射液中5-HMF的限量對確保用藥安全具有重要意義。
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HPLC法測定紫草油中左旋紫草素的含量
摘要:目的 建立紫草油中左旋紫草素的含量測定方法。方法:采用HPLC法測定紫草油中左旋紫草素的含量,色譜柱:島津Shim-packVP-ODS柱(4.6mm×250mm);甲醇-0.025mol/L磷酸(85:15)為流動相;檢測波長:516nm;柱溫:25℃;進樣量:20μL。結果:左旋紫草素在11.2μg/mL~33.6μg/mL濃度範圍內線性關係良好(r=0.9998);平均回收率為101.3%,RSD=1.90%(n=5)。結論:該方法簡便、準確,能排除其他成分的幹擾,可用於紫草油的質量控製和評價。
    紫草油是我院的醫院製劑,由紫草、銀花藤、白芷等中藥組成,具有涼血消炎的作用,臨床用於燙傷的治療,紫草為方中君藥,其有效成分為紫草素,而紫草素含量的高低,直接影響其臨床療效。本實驗采用HPLC法測定紫草油左旋紫草素的含量,方法簡便、準確、重現性好,為控製該製劑的內在質量提供了可靠的方法。
    l儀器與試藥
    1.1儀器高效液相色譜儀LC-1OA,SPD-10AVP紫外檢測器(日本島津);CK chrom data acquieition lO 15system (美國TSP)。
    1.2試藥
    左旋紫草素對照品(中國藥品生物製品檢定所,批號0769—9903);紫草油(本院製劑室提供);超純水;甲醇為色譜純,其餘試劑為分析純。
    2方法與結果
    2.1色譜條件色譜柱:島津Shim-packVP-ODS柱(4.6mm×250mm);流動相:甲醇-0.025mol/L磷酸(85:15) ;流速:1.0 mL/min;檢測波長:516nm;柱溫:25℃;進樣量:20μL(定量環)。
    2.2對照品溶液的製備 精密稱取左旋紫草素對照品2.8 mg,置25mL量瓶中,加入甲醇溶解並稀釋至刻度,製成每mL含112.0μg的溶液,作為對照品儲備液。精密吸取對照品儲備液(1 12.0μg/mL)1.0,1.5,2.0,2.5,3.0 mL置於10mL量瓶中,加甲醇稀釋至刻度。
    2.3供試品溶液製備精密吸取樣品10mL,置分液漏鬥中,加入1% 氫氧化鈉溶液20mL振搖提取3次,每次20mL,合並堿液,加10%鹽酸溶液,調pH值至酸性(pH 2.5~3.5),用氯仿萃取4次(30,30,30,20mL),合並氯仿液,水浴蒸幹,殘渣加甲醇溶解並定量轉移至25mL量瓶中,加甲醇溶液至刻度,搖勻,用0.45μm微孔濾膜濾過,作為供試品溶液。
    2.4線性關係考察取濃度為11.2,16.8,22.4,28.0,33.6μg/mL的對照品溶液,分別進樣20μL,測得峰麵積,以濃度(C)對峰麵積積分值(A)進行線性回歸,回歸方程為A=2.521×10000C一4265,r=0.9998。表明左旋紫草素在11.2μg/mL~33.6μg/mL濃度範圍內,與峰麵積積分值呈良好線性關係。
    2.5精密度試驗取同一份供試品溶液,每次20μL,重複進樣6次,結果平均峰麵積為757099,RSD=0.78%(n=6)。
    2.6穩定性試驗取供試品溶液依上述色譜條件,每隔1h測含量1次(n=5),次日測定2次,積分值無明顯變化,平均峰麵積為742531,RSD為1.01%(n=7)。
    2.7重複性試驗取同批樣品(批號020816)5份,依2.3項下方法製備,照上述色譜條件測定,結果平均含量為58.0μg/mL,RSD為0.90% (n=5)。
    該方法符合重複性要求。
    2.8加樣回收率試驗精密吸取已知含量的樣品溶液,精密加入一定含量的左旋紫草素對照品溶液,依法提取、進樣、測定。
    2.9樣品測定取4批樣品各10mL,依法製成供試品溶液,均以20μL進樣,分別測定吸收峰麵積,外標法計算左旋紫草素含量。
    3討論
    紫草油為油製劑,方中主藥紫草的有效分為紫草素及其衍生物,屬於萘醌色素類化合物。有文獻報道用紫外分光光度法及薄層掃描測定紫草素的含量 ,本方法采用HPLC測定紫草油中左旋紫草素的含量,簡便、靈敏、準確,重複性好,可用於本品的質量控製。樣品測定結果表明,各批號紫草油中左旋紫草素含量差異較大,通過對成品顏色的觀察發現,左旋紫草素含量高的成品顏色深紅,而所測含量較低的成品顏色較淺,這可能與紫草原藥材的質量有關,故應嚴格控製原藥材的來源與質量,並且應加強本製劑中間產品紫草素的質量控製。
薄層色譜法的相關知識簡介
薄層色譜法,係將適宜的固定相塗布於玻璃板、塑料或鋁基片上,成一均勻薄層。待點樣、展開後,與適宜的對照物按同法所得的色譜圖作對比,用以進行藥品的鑒別、雜質檢查或含量測定的方法。
1.儀器與材料

(1) 玻板 除另有規定外,用5cm×20cm,10cm×20cm或20cm×20cm的規格,要求光滑、平整,洗淨後不附水珠,晾幹。
(2) 固定相或載體 最常用的有矽膠G、矽膠GF<[254]> 、矽膠H、 矽膠HF<[254]>,其次有矽藻土、矽藻土G、氧化鋁、氧化鋁G、微晶纖維素、 微晶纖維素F<[254]>等。 其顆粒大小,一般要求直徑為10~40μm。薄層塗布,一般可分無粘合劑和含粘合劑兩種;前者係將固定相直接塗布於玻璃板上, 後者係在固定相中加入一定量的粘合劑,一般常用10~15%煆石膏(CaSO4.2H2O在140℃烘4小時),混勻後加水適量使用,或用羧甲基纖維素鈉水溶液(0.5~0.7%)適量調成糊狀,均勻塗布於玻璃板上。也有含一定固定相或緩衝液的薄層。
(3) 塗布器 應能使固定相或載體在玻璃板上塗成一層符合厚度要求的均勻薄層。
(4) 點樣器 同紙色譜法項下。
(5) 展開室 應使用適合薄層板大小的玻璃製薄層色譜展開缸,並有嚴密的蓋子,除另有規定外,底部應平整光滑,應便於觀察。

2.操作方法

(1) 薄層板製備 除另有規定外,將1份固定相和3份水在研缽中向一方向研磨混合,去除表麵的氣泡後,倒入塗布器中,在玻板上平穩地移動塗布器進行塗布(厚度為0.2~0.3mm),取下塗好薄層的玻板,置水平台上於室溫下晾幹,後在110℃烘30分鍾,即置有幹燥劑的幹燥箱中備用。使用前檢查其均勻度(可通過透射光和反射光檢視)。
 
(2) 點樣 除另有規定外,用點樣器點樣於薄層板上,一般為圓點,點樣基線距底邊2.0cm,樣點直徑及點間距離同紙色譜法,點間距離可視斑點擴散情況以不影響檢出為宜。點樣時必須注意勿損傷薄層表麵。
 
(3) 展開 展開室如需預先用展開劑飽和,可在室中加入足夠量的展開劑,並在壁上貼二條與室一樣高、寬的濾紙條,一端浸入展開劑中,密封室頂的蓋,使係統平衡或按正文規定操作。 將點好樣品的薄層板放入展開室的展開劑中,浸入展開劑的深度為距薄層板底邊0.5~1.0cm(切勿將樣點浸入展開劑中),密封室蓋,待展開至規定距離(一般為10~15cm),取出薄層板,晾幹,按各品種項下的規定檢測。
 
(4) 如需用薄層掃描儀對色譜斑點作掃描檢出,或直接在薄層上對色譜斑點作掃描定量,則可用薄層掃描法。 薄層掃描的方法,除另有規定外,可根據各種薄層掃描儀的結構特點及使用說明,結合具體情況,選擇吸收法或熒光法,用雙波長或單波長掃描。由於影響薄層掃描結果的因素很多,故應在保證供試品的斑點在一定濃度範圍內呈線性的情況下,將供試品與對照品在同一塊薄層上展開後掃描,進行比較並計算定量,以減少誤差。各種供試品,隻有得到分離度和重現性好的薄層色譜,才能獲得滿意的結果。

所屬類別: 行業行規